1．濾光片波長(zhǎng)精度檢查及其峰值測(cè)定：用高精度紫外可見分光光度計(jì)（波長(zhǎng)精度±

0.3nm）對(duì)不同波長(zhǎng)的濾光片進(jìn)行光譜掃描，檢測(cè)值與標(biāo)定值之差即為濾光片波長(zhǎng)精度，其差值越接近于零且峰值越大表示濾光片的質(zhì)量越好。

2．靈敏度和準(zhǔn)確度：（1）靈敏度：加200µl  6µg/ml重鉻酸鉀溶液于小孔中，以0.05mo1

／L硫酸溶液作空白，于450nm（參比波長(zhǎng)650nm）測(cè)定，其吸光度應(yīng)≥0.01（2）準(zhǔn)確度：準(zhǔn)確配制1mmol/L對(duì)硝基苯酚水溶液，以10mmo1／L氫氧化鈉溶液25倍稀釋后加入200µl

于小孔杯中作空白，于405nm（參比波長(zhǎng)650nm）檢測(cè)，其吸光度應(yīng)在0.4左右。

3．通道差與孔間差檢測(cè)：（1）通道差檢測(cè)：取一只酶標(biāo)微孔杯以酶標(biāo)板架作載體，將其內(nèi)含200 μl甲基橙溶液，吸光度0.5左右先后置于八個(gè)通道的相應(yīng)位置，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長(zhǎng)（測(cè)定波長(zhǎng)490nm，參比波長(zhǎng)630nm或650nm）連續(xù)測(cè)三次，觀察其不同通道之間測(cè)量結(jié)果的一致性（2）孔間差的測(cè)量：選擇同一廠家、同一批號(hào)酶標(biāo)板條（8條共96孔）分別加入200µl甲基橙溶液（吸光度調(diào)至0.065～0.070）先后置于同一通道，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長(zhǎng)檢測(cè)，其誤差大小用±1.96s衡量。

4．零點(diǎn)飄移：取8只小孔杯，分別置于8個(gè)通道的相應(yīng)位置，均加入200µl蒸餾水并調(diào)零，采用雙波長(zhǎng)或單波長(zhǎng)（490nm）每隔30min測(cè)定一次，觀察8個(gè)通道4h內(nèi)的吸光度變化，其與零點(diǎn)的差值即為零點(diǎn)飄移。

5．精密度評(píng)價(jià)：每個(gè)通道3只小杯，分別加入200µl高、中、低三種不同濃度的甲基橙溶液，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長(zhǎng)作雙份平行測(cè)定，每日測(cè)定兩次，連續(xù)測(cè)定20天。分別計(jì)算其批內(nèi)精密度、日內(nèi)批間精密度、日間精密度和總精密度及相應(yīng)的CV值。

6．線性測(cè)定：準(zhǔn)確稱取甲基橙配制5個(gè)系列濃度的溶液，采用雙波長(zhǎng)平行檢測(cè)8次，求其均值。計(jì)算回歸方程、相關(guān)系數(shù)r及標(biāo)準(zhǔn)估計(jì)誤差Sy,x，并用±1.96Sy,x表示樣品的95％測(cè)量范圍。

7．雙波長(zhǎng)評(píng)價(jià)：取同一廠家、同一批號(hào)酶標(biāo)板條（每個(gè)通道2條共24孔）每孔加入200µl

甲基橙溶液（吸光度調(diào)至0.065～0.070 ）先后于8個(gè)通道分別采用單波長(zhǎng)（490 nm）和雙波長(zhǎng)（測(cè)定波長(zhǎng)490nm、參比波長(zhǎng)630 nm／650nm）進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果的均值、離散度，比較各組之間是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異以考察雙波長(zhǎng)清除干擾因素的效果。